真菌液态发酵产漆酶的分离纯化研究.rar

摘要:漆酶(Laccase)是含铜的多酚氧化酶，具有很多底物，不仅能催化氧化许多种芳香族化合物、降解木质素、去除苯氧基类除草剂等的毒性，还可以去除石油工业废水中的毒性并且能使许多种染料脱色；因此漆酶在造纸、食品、医药卫生、环保、生物检测等多种领域具有较大的研究价值和应用价值。

　本实验采用实验室保藏的菌种经过培养基活化，经摇床液态发酵培养96h产生了漆酶，漆酶再经过硫酸铵分层盐析、透析、离子交换层析三步分离纯化后利用电泳得到纯的漆酶。其中液态发酵培养基组成为（/50mL）：麸皮1g，尿素0.1g，KH2PO4 0.05g，NH4Cl 0.05g，MgSO4·7H2O 0.05g，50μL浓缩微量元素.28℃，摇床速度为180r/min培养96h。纯化后漆酶纯化的倍数是32.33，回收率约为51.88%，它的分子量大小约为52.8kDa。

关键词：漆酶；多酚氧化物；液态发酵；分离纯化；硫酸铵盐析

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 漆酶-1

1.1.1 漆酶的结构-1

1.1.2 测定漆酶活力的方法-1

1.1.3 漆酶的理化性质-2

1.1.4 漆酶的应用-3

1.2 漆酶在细胞中的分布和生理功能-4

1.3 漆酶的研究现状-4

1.4选题背景及意义-5

1.5本论文研究的主要内容-5

2材料与方法-6

2.1 主要材料-6

2.1.1 实验菌株-6

2.1.2培养基-6

2.1.3实验仪器-6

2.1.4主要试剂-6

2.2实验方法-7

2.2.1产漆酶真菌的活化-7

2.2.2液态培养产漆酶真菌-7

2.2.3漆酶酶活的测定-7

2.2.4高速冷冻离心提取漆酶粗酶液-8

2.2.5漆酶分离纯化-8

3结果与讨论-10

   3.1产漆酶真菌的活化-10

3.2菌种鉴定-10

3.3真菌的液态培养-11

3.4漆酶酶活的测定-11

3.5硫酸铵盐析-12

3.6离子交换层析-12

3.7 Sephadex G-75凝胶层析-13

3.8 SDS-PAGE凝胶电泳-13

3.9漆酶分离纯化后结果分析-13

结论-15

致谢-16

参考文献-17