氧氟沙星单克隆抗体制备与检测.rar

摘要:氧氟沙星是一种在畜禽及水产养殖业中应用比较广泛的喹诺酮类兽药，有抗菌活性强、抗菌谱广等优点，但其残留会对人体造成危害。因此，研究和建立一种能对氧氟沙星残留进行方便、快速和安全的检测方法具有深远的意义。本文以氧氟沙星人工抗原分别免疫编号为A1、A2、B1、B2、C1、C2的六只BALB/C小鼠，间接ELISA法检测它们血清效价，结果分别为1：5000、1：10000、1：20000、1：5000、1：10000、1：10000。选择血清效价为1：20000的B1脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0用于细胞融合，HAT培养基选择性培养融合细胞，间接ELISA法筛选出上清液效价达到1：6400的阳性孔。最后经有限稀释法克隆得到稳定分泌氧氟沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为建立检测氧氟沙星在动物组织中残留的免疫分析法奠定了基础。

关键词：氧氟沙星；细胞融合；单克隆抗体；酶联免疫吸附试验

目录

摘要

Abstract

1 绪论-2

1.1 兽药残留概况-2

1.1.1 兽药残留定义及其分类-2

1.1.2 兽药残留的使用现状-2

1.1.3 兽药残留的危害-2

1.1.4 兽药残留检测方法-4

1.2 氧氟沙星-4

1.2.1 氧氟沙星研究背景-4

1.2.2 氧氟沙星检测-5

1.3 氧氟沙星单克隆抗体-5

1.3.1 单克隆抗体概况-5

1.3.2 单克隆抗体特点-5

1.3.3 单克隆抗体制备-6

1.3.4 单克隆抗体应用-6

1.4 本论文研究的目的及意义-7

2 材料与方法-8

2.1 实验试剂与仪器-8

2.1.1 实验试剂-8

2.1.2 实验主要溶液系统-8

2.1.3 实验仪器-9

2.1.4 实验材料-9

2.2 实验方法-10

2.2.1 小鼠免疫-10

2.2.2 饲养细胞的制备-11

2.2.3 骨髓瘤细胞的培养-12

2.2.4 脾细胞的制备-12

2.2.5 细胞融合-12

2.2.6 选择性培养杂交瘤细胞-13

2.2.7 筛选杂交瘤细胞-14

2.2.8 杂交瘤细胞的克隆化-14

3 结果与分析-15

3.1 氧氟沙星包被抗原最佳工作浓度-15

3.2 小鼠免疫后血清效价-15

3.3 细胞融合和阳性孔的筛选-16

3.4 分析与讨论-17

结论-19

致谢-20

参考文献-21