三唑磷单克隆抗体制备及鉴定_生物工程.rar

摘要:三唑磷是一种被广泛使用的高效有机磷农药，但其残留情况比较严重，且目前对其的免疫分析检测方法尚不常见。本文主要将已成功合成的三唑磷人工免疫抗原对小鼠进行免疫，免疫四次，期间对小鼠断尾取血，用ELISA检测其血清的效价，小鼠的最高倍比稀释度为1:800。将效价最好的小鼠进行解剖，取其脾脏，获得的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，经过筛选纯化成功得到具有产生抗体特性的杂交瘤细胞，用间接ELISA方法检测抗体活性，结果最理想的为1.061。结果表明，三唑磷的免疫分析检测方法可开发检测试剂盒，用于检测三唑磷的残留，该方法快速，方便，可广泛应用于食品的检测生产和环境监测。

关键词：三唑磷；细胞融合；单克隆抗体；杂交瘤

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 三唑磷的概况-1

1.1.1 三唑磷简介-1

1.1.2 三唑磷的危害-1

1.1.3 三唑磷的检测-2

1.2单克隆抗体技术-3

1.3本论文研究的目的及意义-4

2 材料与方法-5

2.1 实验试剂与仪器-5

2.1.1 实验试剂-5

2.1.2 实验仪器-5

2.1.3 实验材料-5

2.2 实验方法-6

2.2.1 动物免疫-6

  2.2.1.1动物的选择-6

  2.2.1.2动物的免疫-6

2.2.2 细胞融合与筛选-6

  2.2.2.1细胞融合-7

  2.2.2.2细胞筛选-8

2.2.3 杂交瘤细胞的克隆-8

  2.2.3.1克隆实验-8

  2.2.3.2克隆的纯化-9

  2.2.3.3抗体的检测-9

  2.2.3.4杂交瘤细胞的克隆化-9

3 结果与分析-11

3.1小鼠免疫效价结果-11

3.2细胞融合克隆结果-11

3.3简介ELISA检测抗体-12

3.4分析与讨论-12

结论-13

致谢-14

参考文献-15