复合诱变黑曲霉E133131选育菊粉酶高产菌株.rar

摘要:本课题以食品生物工程实验中心酶工程实验室保藏的黑曲霉菌株，编号E133131的菌株为出发菌株，对其进行诱变育种研究，以期得到一株内切型菊粉酶的高产菌株。

　　　首先在初始条件下测定E133131菌株发酵生产所产生的内切型菊粉酶的酶活，为0.57U/mL.

　　　对E133131菌株进行紫外线（15W,35min,30cm）诱变，在诱变后生长出的菌株中筛选出 20株菌落直径最大的菌株，对其菌株进行发酵培养，然后测定内切型菊粉酶的酶活，最高的为1.09U/mL，比出发菌株的酶活提高了191.23％。

　　　对经过紫外线诱变的酶活最高的E133131菌株进行氯化锂（1％）诱变，在诱变后生长出的菌株中筛选出 20株菌落直径最大的菌株，对其菌株进行发酵培养，然后测定内切型菊粉酶的酶活，最高的为1.58U/mL，比出发菌株的酶活提高了277.19％。

关键词 内切型菊粉酶；黑曲霉；紫外线；氯化锂；诱变

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 菊粉酶简介-1

1.1.1 菊粉酶的概念-1

1.1.2 菊粉酶的来源-1

1.1.3 菊粉酶的性质-1

1.1.4 菊粉酶的分类-1

1.2 菊粉酶的主要应用-2

1.2.1 利用菊粉酶生产高果糖浆( HFS)-2

1.2.2 利用菊粉酶生产低聚果糖的应用-2

1.2.3 菊粉酶在酒精生产中的应用-3

1.2.4 其 他-3

1.3 研究进展和发展方向-3

1.3.1 筛选高酶活、稳定性好的菌株-3

1.3.2 进行诱变育种以得到高产突变株,以及去阻遏的突变株-3

1.3.3 新技术的采用-3

1.4 诱变育种-4

1.4.1 诱变育种方法的简介-4

1.4.2 物理诱变-4

1.4.3 化学诱变-6

1.4.4 两者比较与复合诱变-7

1.4.5 诱变育种的操作流程-7

1.4.6 诱变育种的一般原则-7

1.5 本实验研究的内容与意义-8

1.5.1 研究内容-8

1.5.2 研究的意义-8

2 材料与方法-9

2.1 实验材料-9

2.1.1 牛蒡-9

2.1.2 菌株-9

2.2 主要试剂-9

2.3 仪器与设备-10

2.4 培养基的配制-10

2.4.1 査氏培养基-10

2.4.2 初筛培养基-11

2.4.3 发酵培养基-11

2.5 化学试剂的配制-11

2.5.1 葡萄糖标准溶液的配制-11

2.5.2 3,5-二硝基水杨酸的配制-11

2.5.3 菊糖的配制-11

2.5.4 牛蒡汁的配制-11

2.6 实验方法-12

2.6.1 黑曲霉菌种的活化-12

2.6.2 内切型菊粉酶酶活的测定方法-12

2.6.3 葡萄糖标准曲线的制备-12

2.6.4 菊粉酶酶活的测定-13

2.6.5 黑曲霉菌种的活化与筛选-13

2.6.6 黑曲霉单胞子悬液的制备-13

2.6.7 黑曲霉的诱变-13

3 结果与分析-15

3.1 葡萄糖标准曲线的建立-15

3.2 酶活的计算公式-16

3.3 菌种初始酶活的测定-16

3.4 单胞子悬液浓度的测定-16

3.5 黑曲霉的紫外诱变-17

3.5.1 紫外诱变致死率的计算-18

3.5.2 孢子突变率的计算-19

3.6 黑曲霉的氯化锂诱变-19

3.6.1 氯化锂诱变致死率的计算-21

3.6.2 孢子突变率的计算-21

结论-22

致谢-23

参考文献-24