pBBR-opd和pKT-opd质粒构建和验证.rar

摘要:随着农药残留超标造成的危害越来越大，为减轻有机磷农药对生物和环境的危害，很多的研究人员做了大量的农药降解方法的研究。本文主要研究目标是结合目前成熟的分子生物学技术和基因工程技术，通过PBBR1-MCS2和PKT230质粒酶切，补平，去磷酸化后分别与黄杆菌opd基因连接重组，再电泳切胶纯化后得到重组质粒大小约为6500bp的pBBR-opd和8100bp的pKT-opd。 重组质粒转移到制备好的感受态细胞中，然后进行蓝白斑筛选，培养皿上有菌生长则表示验证转化成功，对成功菌株进行斜面保藏。最后，对重组质粒进行提取与电泳检测以及PCR检测。为构建一种能够高效降解有机磷农药工程菌做基础。　

关键词：机磷农药水解酶；黄杆菌；基因克隆；基因重组

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 农药概况-1

1.1.1 农药及有机磷农药简介-1

1.1.2 农药的使用现状-1

1.1.3 有机磷农药的危害-2

1.2 微生物降解农药概况-3

1.2.1 农药的降解方法-3

1.2.2 农药的微生物降解方法-4

1.3 目标基因的克隆、转化、重组技术-4

1.3.1 PCR技术简介-4

1.3.2 转化方法简介-5

1.3.3 重组方法简介-5

1.4 本论文研究的目的及意义-6

2 材料与方法-7

2.1 实验试剂与仪器-7

2.1.1 实验材料-7

2.1.2 实验试剂-7

2.1.3 实验仪器-7

2.1.4 培养基的配制-8

2.1.5 化学试剂的配制-8

2.2 实验方法-9

2.2.1 酶切-9

2.2.2 电泳切胶纯化-10

2.2.3 基因重组-11

2.2.4 制作感受态细胞-11

2.2.5 转化-11

2.2.6 重组质粒的提取与电泳检测-12

2.2.7 PCR检测-13

3 结果与分析-15

3.1 酶切后的质粒-15

3.2 重组质粒-15

3.3 转化后抗性筛选-16

3.4 PCR后电泳验证-17

结论-19

致谢-20

参考文献-21