产脂肪酶细菌菌株的筛选与酶学性质研究.doc

摘要：本实验通过从徐州及连云港市区东海县饭店附近下水道里取样，通过初筛获得20株细菌菌株、通过复筛获得16株有活性，其中一株活性最高，通过分子生物学鉴定初步确定该菌株为约氏不动杆菌，命名为TZ-1。对该产脂肪酶菌株发酵条件进行优化，以温度、pH、装液量、接种量、发酵时间和碳源作为单因素，分别设5个水平做实验得出发酵的最适温度为30℃、pH为8、装液量为55mL、接种量为2%、发酵时间为48小时、最适碳源为酵母膏。再选出4因素3水平进行正交实验，得出菌株发酵条件最优组合为温度为30℃、pH值为8、装液量为55mL、碳源酵母膏、接种量2%以及培养时间48小时，最高酶活为22.7U/mL。对脂肪酶酶学性质研究表明，菌株产生的脂肪酶在中性pH为8时下酶活最高，在温度为30℃，脂肪酶活性最高；再通过设定在同一温度下保存不同的时间后测出相应的酶活，得出该菌株产生的脂肪酶对温度稳定性较好，同样方法得出pH中性偏碱下稳定性也较好。

关键词 脂肪酶；筛选；条件优化；正交实验

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 脂肪酶的概述-1

1.1.1 脂肪酶的来源和分类-1

1.1.2脂肪酶的发展状况-2

1.2 脂肪酶的应用-2

1.2.1治理坏境方面-2

1.2.2 食品加工方面-2

1.2.3 医药方面-3

1.2.4 清洁能源方面-3

1.2.5 洗涤制品方面的应用-3

1.3 本文课题研究的目的以及意义-3

2 实验试剂、材料与方法-5

2.1 实验试剂、材料-5

2.1.1 实验试剂-5

2.1.2 培养基-6

2.1.3 实验相关试剂的配制-6

2.1.4 实验主要设备-7

2.2 实验方法-7

2.2.1产脂肪酶菌株的筛选-7

2.2.2脂肪酶活性的测定-8

2.2.3 产脂肪酶菌株16s rDNA测序及保藏-9

2.2.4 产脂肪酶菌株发酵条件的优化-10

2.2.5 菌株发酵条件的正交实验-11

2.2.6 脂肪酶的酶学性质-11

3 结果与分析-12

3.1 产脂肪酶菌株的筛选-12

3.1.1 标准曲线的绘制-12

3.1.2 高产菌株的确定-13

3.2 菌株鉴定-14

3.3 产脂肪酶菌株发酵条件的优化-15

3.3.1 温度对菌株产酶酶活的影响-15

3.3.2 pH对菌株产酶酶活的影响-15

3.3.3 接种量对菌株产酶酶活性的影响-16

3.3.4 碳源对菌株产酶酶活性的影响-16

3.3.5 培养时间对菌株产酶酶活性的影响-17

3.3.6 装液量对菌株产酶酶活性的影响-17

3.4 发酵培养基的正交优化-18

3.5 验证试验-19

3.6 脂肪酶酶学性质-19

3.6.1 脂肪酶的最适温度-19

3.6.2 脂肪酶的最适pH-20

3.6.3 脂肪酶的热稳定性-20

3.6.4 脂肪酶的酸碱稳定性-21

结论-22

致谢-23

参考文献-24