pET30a-DHAB重组子表达条件筛选.doc

摘要：甘油脱水酶（DHAB）是一种关键性限速酶，在以甘油为底物的化学反应中起到关键作用，可以催化甘油生成3-羟基丙醛。为筛选出pET30a-DHAB重组子的最适表达条件，本实验通过培养DH5α（pET30a-DHAB）工程菌，提取pET30a-DHAB重组质粒后，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，得到BL21（pET30a-DHAB）工程菌；通过选择不同的IPTG浓度、不同的诱导时间和不同菌株诱导蛋白质表达，经过SDS-PAGE、染色、脱色后，对实验结果进行分析发现，BL21菌株 0.3 mM IPTG诱导10小时，蛋白质表达含量最高，所以BL21菌株 0.3 mM IPTG诱导10小时为最适表达条件。

关键词 甘油脱水酶；重组子；转化；SDS-PAGE 

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 3-羟基丙酸简介-1

1.2. DHAB基因简介-2

1.2.1甘油脱水酶定义-2

1.2.2甘油脱水酶的结构功能-2

1.2.3甘油脱水酶的研究展望-3

1.3 pET系列载体-3

1.4 本试验研究目的-5

2 材料和方法-6

2.1 实验材料-6

2.1.1 实验菌种：-6

2.1.2 实验仪器-6

2.1.3实验试剂-7

2.1.4 培养基配方-8

2.1.5主要化学试剂配制-8

2.2实验方法-12

2.2.1 质粒DNA提取-12

2.2.2 转化-12

2.2.3 SDS-PAGE-13

3 结果与分析-14

3.1 pET30a-DHAB（BL21）转化、筛选-14

3.2 IPTG诱导浓度筛选（BL21菌株）-16

3.3 不同诱导处理时间-17

结论-19

致谢-20

参考文献-21