培氟沙星人工抗原的合成与抗体制备.doc

摘要:培氟沙星是禽兽常用的氟喹诺酮类药物，是一类广谱高效抗菌药，其残留会对人体造成危害。研究设计合成培氟沙星人工抗原及制备其抗体为研制兽药多残留检测芯片做准备。采用碳二亚胺（EDC）法将培氟沙星（PEF）与载体蛋白进行偶联用来制备免疫抗原PEF-BSA，通过紫外扫描对人工抗原进行鉴定，为进一步制备PEF单克隆抗体提供了良好的免疫原。结果显示，免疫抗原PFF-BSA 紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性，其最大吸收峰在278.5 nm处，PEF-BSA偶联比大约为6.6:1,说明载体蛋白BSA与PEF成功偶联，可用于动物免疫。利用PEF-BSA免疫BALB/c小鼠，无菌条件下收集血清，获得抗体。通过鉴定产生了PEF特异性抗体。间接ELISA法检测抗体效价均达到4000以上，得到了良好的免疫效果。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体，也进一步证明药物偶联成功。

关键词：培氟沙星；人工抗原；碳二亚胺法；特异性抗体

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 兽药残留现状-1

1.2 兽药残留的主要原因-1

1.2.1 不严格遵守休药期有关规定-1

1.2.2 滥用兽药-1

1.2.3 使用被兽药污染的动物饲料-2

1.2.4 使用未经批准的或禁用的兽药-2

1.2.5 用药错误或未做用药记录-2

1.2.6 屠宰前使用兽药-2

1.2.7 使用药物生产产生的废渣、废水饲喂畜禽和鱼类-2

1.3 兽药残留危害-2

1.3.1 毒性作用-2

1.3.2 过敏和变态反应-3

1.3.3 细菌耐药性-3

1.3.4 菌群失调-3

1.3.5 致畸、致癌、致突变作用-3

1.3.6 激素作用-3

1.4 兽药残留检测方法-4

1.5 培氟沙星的概况-4

1.5.1 培氟沙星的应用和危害-4

1.5.2 培氟沙星的检测方法-5

1.6 本论文研究的目的及意义-5

2 材料与方法-6

2.1 实验试剂与仪器-6

2.1.1 实验试剂-6

2.1.2 实验器材-6

2.2 实验方法-6

2.2.1 实验动物-7

2.2.2 培氟沙星人工抗原的合成-7

2.2.3 培氟沙星人工抗原的鉴定-8

2.2.4 小鼠免疫-9

2.2.5 抗血清的处理与鉴定-10

2.2.6 抗血清的保存-12

3 结果与分析-13

3.1 紫外光谱扫描鉴定-13

3.2 抗原PEF-BSA的偶联率-15

3.3 抗血清的鉴定结果-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19