产过氧化氢酶细菌菌株的筛选及产酶条件研究.doc

摘要：为了筛选出过氧化氢酶高产菌株，采用初筛和复筛相结合的方法从实验室保存的100株芽孢杆菌菌株中进行筛选，通过初筛发现该100株菌株都有过氧化氢酶活性，通过复筛，获得2株活性较高的菌株，命名为QS-9和RG-22，酶活分别达到130.0U/mL和189.2U/mL。进一步对RG-22发酵条件进行优化，确定该菌株的最适温度是40度，最适pH7.0，最适转速为180rpm。通过优化后酶活最高达到202.9U/mL。最终通过16SrDNA序列测定，初步确定该菌株为淀粉液化芽孢杆菌。该高产过氧化氢酶高产菌株筛选的成功为下一步过氧化氢酶的实际应用奠定了一定的基础。

关键词 过氧化氢酶；筛选；酶活测定；酶学性质

目录

摘要

Abstract

1绪论-1

1.1过氧化氢酶简单描述-1

1.2过氧化氢酶应用-1

1.2.1食品行业-1

1.2.2纺织工业-1

1.2.3工业酶催化-1

1.2.4 环保-2

1.3过氧化氢酶的研究状况-2

1.4酶活检测方法-2

1.4.1化学滴定方法-2

1.4.2 光度法-2

1.4.3电化学法-3

   1.5研究的目的及意义-3

2 实验材料与方法-4

2.1实验材料-4

2.1.1.培养基-4

2.1.2 主要试剂-4

2.1.3主要仪器-5

2.1.4 缓冲液-6

2.2 实验方法-6

2.2.1 土壤中初筛实验菌株-7

2.2.2菌种纯化-7

2.2.3 菌株复筛-7

2.2.4 测定过氧化氢酶活力-7

2.3 发酵条件的优化-8

2.3.1 pH优化-8

2.3.2 温度优化-8

2.3.3 转数优化-8

2.4 菌种鉴定-8

2.4.1基因组的提取-8

2.4.2 PCR扩增-9

2.4.3 PCR产物纯化-9

2.4.4大肠杆菌感受态的制备与转化-10

2.4.5提取质粒-10

2.4.6 16SrDNA 测定序列-10

3 结果与分析-10

3.1实验菌株筛选与基因组提取-10

3.1.1菌株筛选-11

3.2过氧化氢酶活性检测-11

3.3过氧化氢酶培养条件的优化-11

3.3.1 pH优化-12

3.3.2 温度优化-12

3.3.3 转速优化-13

3.4 过氧化氢酶高产菌株RG-22鉴定-14

3.4.1基因组的提取-14

3.4.2 RG-22序列及其分析-14

结论-15

致谢-16

参考文献-17