黑豆蛋白酶解物中降胆固醇活性肽的分离纯化研究.doc

摘要:本研究采用多酶分步协同水解不同组合方式分离纯化降胆固醇活性肽，以水解产物胆固醇胶束溶解抑制活性为指标,采用大孔吸附树脂、凝胶过滤色谱对得到的混合肽进行分离纯化,并对黑豆蛋白肽进行氨基酸组成分析。 

通过DA201-C型大孔吸附树脂脱盐,同时采用不同浓度乙醇分级分离,得出在乙醇浓度达到75%时洗脱下来的组分具有最高的降胆固醇活性,抑制率为62.16%。对降胆固醇肽氨基酸组成分析可知，当平均疏水值由4.42KJ/mol增大到5.58KJ/mol时，组分中疏水值大于10的氨基酸含量成明显增大趋势。经过体外胃肠道消化系统模拟实验得出，在胃肠道消化后，黑豆肽活性变化较小，具有较稳定的生理活性。降胆固醇肽组分经Sephadex G-15分离时,蒸馏水作为洗脱液对降胆固醇肽的分离有较好的效果。测定Sephadex G-15分离后各部分的活性,得出产生第二个峰的组分对胆固醇胶束溶解度的抑制活性最强,抑制率为71.01%。

关键词：黑豆蛋白；大孔吸附树脂；降胆固醇活性

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1黑豆概述-1

1.2降胆固醇大豆肽-1

1.2.1人体内胆固醇过高的危害-1

1.2.2降胆固醇肽的作用-1

1.2.3降胆固醇肽的研究进展-1

1.3大豆肽分离纯化技术研究进展-2

1.3.1大孔吸附树脂-2

1.3.2凝胶层析法-2

1.4研究的目的及意义-2

2 材料与方法-4

2.1实验材料与仪器-4

2.1.1实验材料-4

2.1.2主要实验仪器-4

2.2 实验方法-4

2.2.1黑豆蛋白的制备-5

2.2.2蛋白质含量的测定-5

2.2.3黑豆蛋白的酶解工艺-6

2.2.4黑豆蛋白酶解物水解度的测定-6

2.2.5胆固醇胶束溶解度抑制率-6

2.2.6 DA201-C大孔吸附树脂分离黑豆肽-7

2.2.7醇洗脱各组分的平均疏水值计算-8

2.2.8黑豆肽的稳定性-8

2.2.9 Sephadex G-15分离黑豆肽-9

2.2.10黑豆蛋白肽的氨基酸组成分析-9

3结果与分析-10

3.1 蛋白质含量标准曲线的制作-10

3.2 黑豆蛋白水解产物的水解度分析-10

3.3 DA201-C大孔吸附树脂分离黑豆-11

3.3.1水解液pH对大孔吸附树脂吸附量的影响-11

3.3.2水解液与大孔吸附树脂的混合比对吸附量的影响-11

3.3.3 DA201-C大孔树脂对黑豆肽的静态吸附动力学实验-11

3.3.4 DA201-C大孔吸附树脂对黑豆肽的静态解吸动力学研究-12

3.3.5大孔吸附树脂的静态乙醇分级洗脱和降胆固醇肽的氨基酸组成-12

  3.4Sephadex G-15分离降胆固醇肽-14

3.4.1不同洗脱液对黑豆降胆固醇活性肽的分离效果-14

    3.4.2洗脱液各组分对胆固醇胶束溶解度的抑制效果-15

  3.5黑豆肽的稳定性-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19