黄精多糖的分离纯化及抗氧化活性研究.doc

摘要:课题以生黄精（RP）和精炮制后的熟黄精（PRP）为原料，采用闪式提取提取多糖，并以抗氧化活性为指标，分别用乙醇分级醇沉、DEAE-52和Sephadex G-75进行纯化。试验结果表明，生黄精和熟黄精多糖经乙醇分级醇沉后40%、60%和80%组分的得率分别为3.58%、29.42%、30.81%和5.12%、5.12%、14.05%，多糖含量分别为79.66%、88.92%、99.28%和57.94%、70.18%、75.24%，几乎不含有蛋白质和多酚。以DPPH•、O2-•、•OH和还原力四个指标筛选多糖级分中的最优组分为40%的生黄精多糖和40%的熟黄精多糖，其对DPPH•抑制率的IC50值分别为0.4726mg/mL、0.7020mg/mL。对其再用DEAE-52、Sephadex G-75柱进一步分离纯化，最终得到RPPs-1、RPPs-2、RPPs-3、PRPPs-1、PRPPs-2、PRPPs-3六种黄精多糖组分，均呈单一对称峰，说明样品为均一多糖。紫外吸收光谱结果显示六种多糖中均不含蛋白质和核酸。比较纯化前后黄精多糖的抗氧化性，结果显示40%乙醇沉淀获得的生黄精和熟黄精多糖经纯化后清除DPPH•的能力有所下降，其最佳组分RPPd-3和PRPPd-3的IC50值分别为3.0670mg/mL和1.3976 mg/mL，均大于粗多糖的IC50值（0.4726mg/mL和0.7020mg/mL），说明经分离纯化后获得的单一多糖组分的抗氧化活性有所降低。

关键词 黄精；多糖；分离纯化；抗氧化

目录

摘要

Abstract

1 绪论.1

1.1 黄精的概况1

1.2 多糖的研究进展1

1.2.1多糖.1

1.2.2 多糖的提取 1

1.2.3 多糖的纯化分离.2

1.2.4多糖的生理功能 3

1.3 本课题研究意义4

1.4 本课题研究内容4

2 材料与方法.5

 2.1 材料5

2.1.1 原料.5

2.1.2 试剂.5

2.1.3 仪器.5

2.2 方法6

2.2.1黄精多糖的提取.6

2.2.2 Sevage法除蛋白6

2.2.3 乙醇沉淀分离多糖.6

2.2.4 多糖含量的测定.6

2.2.5 蛋白质含量的测定.7

2.2.6多酚含量的测定.7

2.2.7 黄精多糖的分离.8

2.2.8体外抗氧化活性的测定.9

2.2.9黄精多糖结构的初步鉴定.10

3 结果与分析.11

3.1乙醇分级黄精多糖得率及多糖、蛋白质和多酚含量分析11

3.1.1多糖、蛋白质和多酚含量测定标准曲线绘制.11 

3.1.2 乙醇分级黄精粗多糖得率及多糖、蛋白质和多酚含量分析12

3.2黄静多糖的分离纯化12

3.2.1黄精多糖的DEAE-52纤维素柱层析结果.12

3.2.2黄精多糖的Sephadex-75凝胶柱层析14

3.3黄精多糖抗氧化活性测定结果17

3.3.1 乙醇分级醇沉对黄精多糖抗氧化活性的影响.17

3.3.2 DEAE-52纯化对黄精多糖抗氧化活性的影响22

3.3.3 分离纯化前后黄精多糖抗氧化活性的比较.23

3.4黄精精多糖纯度的鉴定23

结论.27

致谢.28

参考文献.29