一种食源性迟钝爱德华菌快速检测方法研究.doc

摘要:迟钝爱德华氏菌是全球范围内鱼类养殖的一种重要致病菌，可以对淡水和海水养殖的多种鱼类造成感染，导致渔业经济的重大损失。现如今，在水产养殖过程中，治疗细菌性疾病仍然依靠抗生素，然而因为抗生素使用泛滥，使水产耐药微生物的种类和数量不断上升。

本文对一种食源性迟钝爱德华菌的检测方法进行研究，利用革兰氏阴性菌基因组提取方法，提取E.tarda等细菌基因组DNA。然后采用浓度为1%的琼脂糖凝胶检测提取的基因组DNA，利用目的基因Ese D为检测对象，通过PCR方法检测迟钝爱德华氏菌。结果表明Ese D基因是迟钝爱德华菌的目的基因，可以用它来检测爱德华菌。

关键词：迟钝爱德华菌；凝胶电泳；PCR扩增；快速检测

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 微生物分类的研究进展-1

1.2 食源性致病微生物检测-1

1.2.1 食源性致病微生物的种类-1

1.2.2 食源性致病微生物检测方法-2

1.2.3 食源性致病菌检测的研究进展-4

1.3 常用的食品安全检测方法-4

1.3.1 色谱技术-4

1.3.2 光谱技术-4

1.3.3 食品安全检测存在的主要问题-5

1.4 迟钝爱德华菌的研究进展-6

1.4.1 迟钝爱德华菌的生物学性状-6

1.4.2 迟钝爱德华菌的致病性研究-6

1.4.3 迟钝爱德华菌的检验方法-6

1.5 本研究的目的与意义-7

2　实验材料与方法-8

2.1 实验试剂和仪器-8

2.1.1 实验试剂-8

2.1.2 实验仪器-8

2.2 实验方法-9

2.2.1 培养基的配制与灭菌-9

2.2.2 基因组DNA提取与检测-10

2.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测-11

2.2.4 PCR扩增目的基因EseD-11

2.2.5 PCR产物的回收与序列分析-12

2.2.6 目的基因EseD在其他常见病原微生物中扩增-12

3 结果与讨论-13

3.1 实验结果-13

3.1.1 以迟钝爱德华菌为基因组模板的扩增结果-13

3.1.2 以嗜水气单胞菌为基因组模板的扩增情况-14

3.1.3 以其他菌株为模板的扩增片段的测序验证-14

3.2 讨论-18

3.2.1 本课题实验方法的注意事项-18

3.2.2 迟钝爱德华菌的检测-18

结论-19

致谢-20

参考文献-21