乙醛脱氢酶基因表达载体构建.doc

摘要:乙醛脱氢酶是以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为辅酶，用来催化醛反应的一种酶类，本实验尝试对其基因构建表达载体。本次试验经由酿酒酵母菌活化培养，对其基因组DNA提取，并进行ALDH基因PCR扩增，之后与克隆载体pMD18-T连接，扩大培养，菌落PCR筛选获可用重组子，并用BamHⅠ和SacⅠ对重组子和表达载体pET28a进行双酶切后，连接两者，获得ALDH基因表达载体。通过实验发现，经由大肠杆菌表达体系，对ALDH基因表达载体构建方法可行，并成功完成ALDH基因表达载体构建。

关键词 乙醛脱氢酶；酿酒酵母菌；大肠杆菌；PCR；载体

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 乙醛脱氢酶概述-1

1.1.1 乙醛脱氢酶定义-1

1.1.2 乙醛脱氢酶功能机理-1

1.2.1 酿酒酵母是实验的理想菌株-1

1.2.2 酿酒酵母科学应用-2

1.2.3 酿酒酵母中乙醛脱氢酶的发展-2

1.3 3-羟基丙酸简介-3

1.4 目的基因的克隆技术（PCR技术）-3

1.5 本论文的研究目的-4

2材料及方法-5

2.1 实验材料-5

2.1.1 实验菌种-5

2.1.2 实验仪器-5

2.1.3 实验试剂-5

2.1.4 培养基配方-6

2.1.5所用化学试剂的配制方法-6

2.2 实验方法-7

2.2.1 酿酒酵母菌的培养-7

2.2.2 酿酒酵母菌基因组DNA提取-7

2.2.3 ALDH基因扩增及电泳验证-7

2.2.4 ALDH基因与克隆载体连接-9

2.2.5 ALDH基因转化-9

2.2.6 菌落PCR-9

2.2.7 质粒DNA提取-10

2.2.8 ALDH基因与表达载体连接-10

3 结果与分析-11

3.1 ALDH基因的扩增-11

3.2 ALDH基因和克隆载体pMD18-T连接-12

3.2.1 克隆载体pDM18-T-12

3.2.2 pMD18-T-ALDH重组子筛选-13

3.2.3 pMD18-TALDH重组子酶切-14

3.3 ALDH基因和表达载体连接-15

3.3.1 表达载体pET28a（+）-15

3.3.2 ALDH基因和pET28a（+）连接-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19