芫荽中多酚氧化酶的分离纯化及特性研究.doc

摘要:芫荽是餐桌上常见的芳香开胃之品营养成分中胡萝卜素和铁的含量较高，是绿叶蔬菜中的佼佼者，并且富含蛋白质、脂肪、糖类、尼克酸、膳食纤维、维生素、视黄醇等营养物质。其中含有的多酚氧化酶也具有很高的研究开发价值。为分离芫荽中的多酚氧化酶，通过榨汁，匀浆，冷藏静置后用纱布过滤，并进行高速冷冻离心进行纯化，获得粗酶液，再经过硫酸铵分级盐析，透析，DEAE-Sepharose层析柱获得纯度较高的多酚氧化酶液。酶的比活力5622.95 U/mg，最适pH值6.5，pH稳定性6.5，最适温度40 ℃，在温度为50 ℃时稳定性最好。最适pH值为6.5；金属离子剂稳定性Ba2＋、Ca2＋、Hg2＋对芫荽叶PPO均有较强的抑制作用且作为重金属离子，高浓度会使PPO变性而达到抑制作用。抑制剂稳定性叠氮化钠、半胱氨酸抑制性最强。对不同底物的催化底物邻苯二酚为底物时为最佳。

关键词 芫荽；多酚氧化酶；分离纯化；性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-3

1.1芫荽与芫荽的研究概况-3

1.1.1芫荽的简介-3

1.1.2芫荽的成分分析-3

1.1.3芫荽的营养价值及优势-3

1.2多酚氧化酶的简介-3

1.2.1多酚氧化酶的性质-3

1.2.2 多酚氧化酶的应用-4

1.3课题相关原理-4

1.3.1硫酸铵分级盐析-4

1.3.2透析-5

1.3.3离子交换柱-5

1.3.4凝胶过滤层析-6

1.3.5酶活性的检测原理-6

1.3.6蛋白质含量的测定原理-7

2实验材料与方法-7

2.1 实验材料与仪器-7

2.1.1 实验材料与试剂药品-8

2.1.1 实验仪器-8

2.2 实验方法-8

2.2.1多酚氧化酶的分离纯化-8

2.2.1.1硫酸铵分级盐析-8

2.2.1.2透析-8

2.2.1.3离子交换柱-9

2.2.1.4凝胶过滤层析-9

2.2.2多酚氧化酶的理化性质-9

2.2.2.1酶活性的测定-10

2.2.2.2最适作用pH-10

2.2.2.3 pH稳定性-10

2.2.2.4最适作用温度-10

2.2.2.5热稳定性-10

2.2.2.6金属离子和抑制剂稳定性-11

2.2.2.7对不同底物的催化特性-14

2.2.3蛋白质含量的测定原理-8

3实验结果和讨论-12

3.1 实验结果-12

3.1.1 多酚氧化酶酶活-12

3.1.2 多酚氧化理化性质-12

结论-16

致谢-17

参考文献-18