卷枝毛霉不同菌株脂质积累差异的生化途径分析.doc

摘要:卷枝毛霉作为一种产油微生物，富含丰富的γ-亚麻酸，常常作为脂质积累的模式菌被广泛研究。实验发现两株卷枝毛霉AS3.2484和卷枝毛霉CBS277.49产脂差异性显著，前者脂肪酸比后者高一倍多，同一种属的两株不同菌株，有如此大的产脂差异性，本研究就是以这两株卷枝毛霉为模式菌株，分析其脂肪积累相关酶活的变化，旨从生化途径层面找出导致这两株产脂差异的原因，从而进一步了解微生物脂肪积累的机理。

首先，相同条件下摇瓶发酵测量生物量和总脂肪酸含量，发现卷枝毛霉AS3.2484的生物量与总脂肪酸含量都远远大于卷枝毛霉CBS277.49，因此将两株菌装进发酵罐中进行发酵培养。

其次，通过发酵罐发酵培养所测定的生物量和总脂肪酸含量，卷枝毛霉AS3.2484仍然远大于卷枝毛霉CBS277.49，明确卷枝毛霉AS3.2484产脂能力优于卷枝毛霉CBS277.49.

最后，测定并分析了发酵罐培养卷枝毛霉脂质合成相关酶的活性，结果表明：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶及ATP柠檬酸裂解酶的活性变化与胞内总脂肪酸含量的变化趋势呈较好的相关性，是卷枝毛霉油脂积累过程中的关键酶。

关键词：卷枝毛霉；油脂积累；酶活

目录

摘要

ABSTRACT

第一章 绪论-4

1.1 γ-亚麻酸的研究进展-4

1.1.1 γ-亚麻酸的生物学作用-4

1.1.2 γ-亚麻酸的生物资源-6

1.1.3 γ-亚麻酸的研究现状及应用前景-7

1.2 微生物油脂积累机制及产脂相关酶的研究概况-7

1.2.1 微生物油脂积累机制-7

1.2.2 脂质合成相关酶-8

1.2.2.1 产还原力相关酶-8

1.3 立题依据及意义-9

1.4 主要研究内容-10

第二章 材料与方法-11

2.1 实验材料-11

2.1.1 菌株-11

2.1.2 主要仪器-11

2.1.3 主要试剂-11

2.1.4 主要试剂配制-11

2.1.5 培养基配方-12

2.2 实验方法-12

2.2.1 培养方法-12

2.2.2 生物量的测定-12

2.2.3 发酵上清液分析-13

2.2.4 总脂肪酸含量及其脂肪酸组分分析-13

2.2.5 发酵过程中脂质积累相关酶的活性测定-14

第三章 结果与讨论-16

3.1 摇瓶发酵比较两株卷枝毛霉-16

3.1.1 两株卷枝毛霉生物量的差异-16

3.1.2 两株卷枝毛霉总脂肪酸含量的差异-17

3.2 发酵罐培养比较产脂高低的两株卷枝毛霉-18

3.2.1 发酵罐中两株卷枝毛霉生物量的差异-18

3.2.2 发酵罐中两株卷枝毛霉总脂肪酸含量的差异-19

3.3 发酵罐中产脂高低两株卷枝毛霉酶活的变化-20

3.3.1 苹果酸酶-20

3.3.2 NADP+-异柠檬酸脱氢酶-21

3.3.3 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-22

3.3.4 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶-23

3.3.5 ATP柠檬酸裂解酶-24

3.3.6 NAD+-异柠檬酸脱氢酶-24

第四章 主要结论与展望-26

4.1 主要结论-26

4.2 展望-26

致  谢-27

参考文献28