D-阿洛酮糖3-差向异构酶的固定化研究.doc

摘要:采用树脂固定酶法，从7 种离子交换树脂和吸附树脂中，筛选出固定化效果较好的大孔强碱苯乙烯系阴离子交换树脂D202-Ⅱ为载体，以戊二醛为交联剂，通过先吸附后交联的方法对 D-阿洛酮糖3-差向异构酶的固定化进行研究。实验以固定化酶的相对酶活和相对酶活回收率作为衡量指标，得到了最佳的固定化条件，并且对固定化和游离状态下的D-阿洛酮糖3-差向异构酶的酶学性质进行了比较。结果表明，最佳固定化酶条件为: 加酶量为 7.5 U/0.5g( 酶活单位/树脂) ，吸附时间为4 h，吸附温度为30 ℃，戊二醛浓度为0.05% ，交联时间为4 h。固定化酶重复使用7次，酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上。

选取海藻酸钠作为固定化细胞的载体，以戊二醛作为交联剂，釆取包埋交联法固定，得到最佳固定化细胞条件为：海藻酸钠浓度为3%，细胞终浓度为60 g/L，CaCl2浓度为2%，固定化时间为4 h，戊二醛浓度为0.05% ，交联时间为4 h，最适反应温度70 ℃，最适pH8.0。固定化酶重复使用8次，酶活仍能稳定保持在初始酶活的45%以上，具有良好的操作稳定性。

关键词：D－阿洛酮糖3－差向异构酶；海藻酸钠；树脂；固定化

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1  D－阿洛酮糖简介-1

1.1.1  D-阿洛酮糖自然界分布和来源-1

1.1.2  D-阿洛酮糖的保健功能-2

1.1.3  D-阿洛酮糖在食品加工中的应用-2

1.1.4  D-阿洛酮糖制备研究进展-3

1.2  固定化技术简介-4

1.2.1  固定化酶的技术简介-4

1.2.2  酶的固定化方法-4

1.2.3  固定化细胞技术简介-5

1.2.4  固定化细胞的方法-6

1.3  D-阿洛酮糖3-差向异构酶的固定化研究进展-6

1.4 立题背景及意义-7

1.5 本课题的研究内容-7

第2章 实验材料与方法-9

2.1  材料与试剂-9

2.1.1 实验材料-9

2.1.2 主要试剂-9

2.1.3 主要仪器-9

2.2 实验方法-9

2.2.1  DPE粗酶液的制备-9

2.2.2  DPE粗酶液的纯化-9

2.2.3  Folin-酚法测定纯化的重组蛋白浓度-10

2.2.4  DPEase的酶活测定-10

2.2.5  树脂固定DPE酶的条件优化-10

2.2.6  固定化DPE酶的酶学性质及稳定性研究-11

2.2.7 海藻酸钠固定化DPE重组细胞的条件优化-12

2.2.8 固定化细胞的酶学性质及稳定性研究-12

第3章 结果与分析-13

3.1  DPE酶的纯化与浓度测定-13

3.2  树脂固定化酶条件的优化-14

3.2.1  树脂载体的选择-14

3.2.2 加酶量的优化-14

3.2.3 吸附温度的优化-15

3.2.4 吸附时间的优化-15

3.2.5 戊二醛浓度的优化-16

3.2.6 戊二醛交联时间的优化-16

3.3  固定化DPE酶的酶学性质及其稳定性研究-17

3.3.1 最适温度与温度稳定性-17

3.3.2 最适pH与pH稳定性-18

3.3.3 固定化酶的操作稳定性-19

3.4  固定化重组细胞的条件优化-19

3.4.1  海藻酸钠浓度对固定化的影响-19

3.4.2  细胞终浓度的优化-20

3.4.3  CaCl2浓度的优化-20

3.4.4  固定化时间的优化-21

3.4.5  戊二醛浓度的优化-21

3.4.6-戊二醛交联时间的优化-22

3.5  海藻酸钠固定化细胞的酶学性质与稳定性研究-22

3.5.1  最适反应温度与温度稳定性-22

3.5.2 最适反应pH及pH稳定性-23

3.5.3  固定化细胞的操作稳定性-24

第4章 结论与展望-25

4.1结论-25

4.2不足之处及未来展望-25

参考文献-26

致  谢-29