细菌抗菌肽产生菌的筛选鉴定及其理化性质研究.doc

摘要:抗菌肽是一类普遍存在于生物体内的阳离子两亲性多肽，是机体免疫防御的重要组成部分，具有抗菌谱广、作用强且迅速、不易产生耐药等众多优点。近年来随着人类对抗菌肽研究的进一步深入，不断从微生物中发现和提取具有抗菌活性的肽类物质。而且微生物来源的抗菌肽是抗菌肽家族中的重要一员，它能特异性杀死竞争菌而对宿主本身无害。

本文的研究对象就是从土壤中筛选出的能产生细菌抗菌肽的菌株。本文概述了抗菌肽的分类和作用机制，但是着重介绍了细菌抗菌肽的分类、研究近况、开发利用状况及其应用前景。

为明确细菌抗菌肽的理化性质，研究了温度、pH变化、紫外线照射时间、蛋白酶、金属离子和有机溶剂对抗菌蛋白稳定性的影响。结果表明：对温度有较高的稳定性，在80℃温度之内发酵液的活性很稳定，虽然在100℃温度以后发酵液的活性有所下降，但是下降的幅度并不是非常大，抗菌蛋白经120℃处理60min后还仍保持原有活性的70.59%；此粗蛋白耐酸耐碱，在pH值2～10范围内，发酵液的活性比较稳定。另外，在紫外照射下，照射时间5h内，发酵液是比较稳定的，超过5h后就不稳定，活性开始下降，甚至为零。对甲醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿不敏感，其活性基本不变，而对乙醚较敏感，其活性下降为零。对重金属离子敏感，浓度为10mmol/L的Na+、K+、Mg2+、Cu2+、Ca2+、Ag+、Li+和Zn2+能够降低活性的25%左右；对木瓜蛋白酶和植物蛋白酶很敏感，其活性几乎为零。

关键词 细菌抗菌肽；筛选；理化性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 抗菌肽的概述-1

1.1.1 抗菌肽的发现-1

1.1.2 抗菌肽的概念-1

1.1.4 抗菌肽的理化性质作用机理和作用范围-4

1.1.5 抗菌肽的应用-6

1.1.6 抗菌肽的应用前景-6

1.2 细菌抗菌肽的概述-7

1.2.1 细菌产生的抗菌肽-7

1.2.2 细菌抗菌肽的应用研究-8

1.2.3细菌抗菌肽的应用现状及前景-8

2 材料与方法-10

2.1仪器与试剂-10

2.1.1主要仪器-10

2.1.2主要试剂-10

2.1.3主要原材料-11

2.2 细菌抗菌肽产生菌的初筛-11

2.2.1、土壤样品的采集-11

2.2.2 配制固体培养基（Nutrient Broth NB培养基）-11

2.2.3 倒平板-12

2.2.4 土样处理-12

2.2.5 涂布土样-12

2.2.6 挑取菌斑到新的平板上-12

2.2.7 氯仿熏蒸-13

2.2.8 倾倒指示菌-13

2.2.9 保存菌株-13

2.3 细菌抗菌肽产生菌的复筛-13

2.3.1配制种子培养基（100ml培养基加入量）-13

2.3.2 配制发酵液（100ml培养基加入量）-13

2.3.3初筛的菌株的发酵-14

2.3.4 平板打孔测定发酵液的活性-14

2.4 菌株的发酵液的理化性质研究-14

2.4.1. 发酵液热稳定性的研究-14

2.4.2 发酵液pH稳定性的研究-15

2.4.3 发酵液紫外照射稳定性的研究-15

2.4.4. 发酵液对有机溶剂的稳定性的研究-15

2.4.5 发酵液的金属离子稳定性的研究-15

2.4.6. 发酵液对有机溶剂的敏感性的研究-15

2.4.7 发酵液的蛋白酶稳定性的研究-15

3 结果与讨论-16

3.1 细菌抗菌肽产生菌初筛-16

3.2 细菌抗菌肽产生菌的复筛-16

3.3 复筛菌株发酵液的理化性质研究-17

3.3.1 发酵液的热稳定性的研究-17

3.3.2 发酵液pH稳定性的研究-18

3.3.3 发酵液紫外照射稳定性的研究-19

3.3.4 发酵液对有机溶剂的稳定性的研究-20

3.3.5 发酵液的金属离子稳定性的研究-21

3.3.6 发酵液对有机溶剂的敏感性的研究-23

3.3.7 发酵液的蛋白酶稳定性的研究-24

结论-26

致谢-27

参考文献-28